Calibrar pipetas

Uma pipeta é um tipo de equipamento de laboratório usado para medir e transferir quantidades muito pequenas de líquido. Exatidão e precisão na medição da pipeta são necessárias, pois qualquer desvio nos volumes dispensados ​​pode afetar os resultados de um experimento. Para garantir a precisão, é necessário verificar a calibração da pipeta a cada poucos meses. O processo de calibração ajuda a verificar se o equipamento está dispensando os volumes corretos para que possa ser retificado caso não seja.

Degraus

Parte 1 de 2: Verificando a calibração

Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 1
1. Reúna os materiais necessários. Para verificar a calibração de uma pipeta, você precisará de uma pipeta, pontas de pipeta, água destilada, um béquer, termômetro, uma balança e pratos. A balança deve ser específica para microgramas para calibrar micropipetas com no máximo 1 µl.
  • Você não precisa de mais de 5 ml de água. Encha o copo com a água.
  • Certifique-se de que as pontas da pipeta se encaixam corretamente.
Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 2
2. Meça a temperatura da água destilada. Coloque o termômetro na água e deixe descansar por pelo menos um minuto. Se a linha vermelha no termômetro ainda se mover, deixe por mais um minuto. Após um minuto, registre a temperatura em um caderno. Remova o termômetro e seque-o quando terminar.
  • A temperatura da água é importante para os cálculos que são feitos para verificar a calibração.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 3
    3. Coloque a balança na balança e coloque-a em zero. Idealmente você usa uma balança com portas e uma sala isolada. Coloque a tigela na sala e feche as portas. Se não houver portas, basta colocar a tigela na balança. Pressione o botão `Zero` ou `Tare` e aguarde a leitura da balança para zero.
  • Ao zerar a balança, o peso da tigela plástica não é incluído e torna-se possível medir apenas o peso do que você coloca na tigela.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 4
    4. Prepare a pipeta para calibração. Limpe a pipeta com etanol para matar quaisquer contaminantes antes de começar - também certifique-se de que a ponta da pipeta não fique entupida. Coloque a ponta correta no final e defina o volume que deseja testar.
  • Para calibração, teste o menor volume e o maior volume que a pipeta pode fornecer.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 5
    5. Lave a ponta antes de calibrar. Pressione o botão até o primeiro batente e insira a ponta na água destilada de modo que aproximadamente 2 mm dela fique submersa no líquido. Solte o botão para sugar um pouco de líquido e, em seguida, dispense o líquido novamente pressionando o botão para baixo. Repita três vezes para lavar a ponta.
  • Pressione o botão até a segunda parada para dispensar qualquer líquido deixado na ponta e, em seguida, remova a pipeta da água.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 6
    6. Aspirar o volume de calibração. Com a ponta fora do líquido, pressione o botão até a primeira parada. Coloque cerca de 2 mm da ponta na água destilada e solte o botão para puxar o líquido para a ponta. Aguarde cerca de um segundo antes de remover a ponta da água.
  • Certifique-se de que a ponta esteja completamente submersa durante todo o processo de aspiração. Você não quer bolhas na ponta, caso contrário o resultado não ficará certo.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 7
    7. Dosear o líquido na balança na balança. Coloque a ponta contra o fundo da tigela e empurre o botão para baixo até a primeira parada. Mova-se para outro local, ligeiramente afastado da água, e aperte o botão até a segunda parada. Mantenha pressionado o botão e levante a ponta da balança.
  • Mantenha a ponta na pipeta, pois você a usará novamente para fazer mais testes de calibração. Certifique-se de que a ponta não toque em nada.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 8
    8. Registre o peso indicando a balança. Feche a porta ao usar uma balança em uma sala isolada. Aguarde os valores pararem de mudar. Escreva este valor em seu caderno.
  • É importante esperar que o número se estabilize antes de anotá-lo. Suas leituras estarão erradas se você não esperar.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 9
    9. Repita este processo até ter feito pelo menos 10 medições. Zere a balança, lave a ponta, aspire o mesmo volume, dispense o volume e depois tire o peso. Você precisa de várias gravações do mesmo volume e, em seguida, pode calcular a média de todas as gravações juntas.
  • Você pode repetir esse mesmo processo com volumes diferentes, desde que faça várias medições por volume.
  • Parte 2 de 2: Calculando os resultados

    Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 10
    1. Use a fórmula para o volume calculado. A fórmula para calcular o volume dispensado pela pipeta é V = w *Z, onde w é o peso da água, Z é o fator de conversão baseado na densidade da água e V é o volume calculado de quanta água tem foi dispensado.
    • Você pode encontrar a variável Z pesquisando a densidade da água usando a temperatura registrada no início do experimento.
    • Por exemplo: Se a temperatura da água era 23°C, você assume um valor Z de 1,0035 µg/mg.
    Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 11
    2. Calcule a média das tentativas repetidas. Você deve ter pesado o volume de água dispensado pela pipeta pelo menos 10 vezes. Para calcular a média de todos esses valores, some-os e divida por 10. Se você fez mais ou menos tentativas, adicione cada tentativa e divida a soma pelo número total de tentativas.
  • Por exemplo: Os dez pesos que você registrou para um volume de pipeta de 10µl são os seguintes: 9,89, 10,01, 10,02, 9,99, 9,95, 10,04, 9,96, 10,01, 9,99 e 9,98.
  • A média é: (9,89 + 10,01 + 10,02 + 9,99 + 9,95 + 10,04 + 9,96 + 10,01 + 9,99 + 9,98) / 10 = 99, 84/10 = 9.984
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 12
    3. Aplique as variáveis ​​à equação e resolva-a. Depois de determinar os valores corretos para cada variável, você pode fatorá-los na equação e resolver o volume calculado. Para resolver isso, basta multiplicar o peso médio de todos os valores de teste pelo valor Z.
  • Por exemplo: V = w *Z = 9,984 *1,0035 = 10,019
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 13
    4. Calcular a precisão da pipeta. Para calcular a precisão, você pode usar a equação A = 100 x Vmédia/V0 uso, onde A é a precisão da pipeta, Vmédia o volume médio calculado, e V0 o valor que você definiu para o conta-gotas. A precisão deve estar entre 99-101%.
  • Se a pipeta estiver devidamente calibrada, o valor calculado deve estar muito próximo do valor real que você definiu na pipeta.
  • Por exemplo: A = 100 x Vmédia/V0 = 100 x 10,019/10 = 100 x 1,0019 = 100,19%
  • Esta pipeta está devidamente calibrada.
  • Imagem intitulada Do Pipette Calibration Step 14
    5. Envie a pipeta para calibração, se necessário. Se sua pipeta não passar no teste de calibração, pare imediatamente de usá-la para experimentos. As pipetas são peças muito delicadas e caras de equipamentos de laboratório. Você não pode reparar a calibração sozinho, então você terá que enviá-la para manutenção adequada. Alternativamente, algumas empresas virão ao seu laboratório e calibrarão suas pipetas.
  • Para serviço, entre em contato com a empresa que fabrica sua marca específica de pipeta.

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